Técnica Histológica
Es una rebanada muy delgada (corte histológico) de una pequeña parte de tejido corporal, colocada sobre una lámina porta-objeto, coloreada y cubierta por una lámina cubre-objeto.
Se obtiene mediante la aplicación de la técnica de "inclusión de parafina y coloración de Hematoxilina y Eosina".
Son todos los procedimientos destinados a obtener preparaciones histológicas.
Obtención del material
Puede ser material procedente de animales o humanos obtenido por biopsia o autopsia.
Es un procedimiento diagnóstico que consiste en la extracción de una muestra de tejido de un organismo vivo para, posterior a la técnica histológica, examinarla al microscopio.
Excisional
Se extirpa la lesión o el órgano en su totalidad.
Incisional
Se obtiene parte del órgano o lesión.
Es el estudio analítico y sistemático completo, tanto macroscópico como microscópico de los órganos, aparatos y sistemas de un
cadáver.
Etapas para obtener un preparado histológico
Fijación
Interrumpir el desarrollo de los procesos orgánicos, fijando y
conservando de la forma más fidedigna posible el estado y la situación en que se
encontraban los tejidos.
Fijadores
Elaboración del bloque de parafina
Impregnar los tejidos con una sustancia líquida que luego pasa a una fase consistente homogénea, necesaria para obtener cortes histológicos delgados y uniformes.
Pasos
Destruir los microorganismos patógenos.
Impedir la degradación enzimática de las células y tejidos por autolisis.
Endurecer el tejido
Abolir el metabolismo celular.
Utilidad de la fijación
Técnica de la fijación
Inmersión
Colocar el tejido en un recipiente con el fijador.
Perfusión
Introducir el fijador por vía sanguínea.
Coagulan las sales protéicas de las células, endureciendo los geles e inactivando las enzimas.
Físicos
Químicos
Simples
Una sola sustancia química.
Compuestos
Varias sustancias químicas.
Desecación
Calor seco
Calor húmedo
Frío
Congelación y desecación
Ácido ósmico
Tetróxido de osmio
Glutaraldehído
Líquido de Fleming (cromio-osmio-acética)
Líquido de Zenker (bicromato-sublimado-acética)
Líquido de Helly (Zenker-formol)
Líquido de Bouin (picro-formos-acética)
Líquido de Duboscq-Brasil (ácido pícrico, formaldehído y ácido acético glacial)
Alcohol metílico
Formol
Alcohol etílico
Deshidratación
Sumergir el tejido en concentraciones de alcohol crecientes.
El agua de la célula sea reemplazada por alcohol.
Aclaramiento
El xilol
Sumergir el tejido en xilol, posterior al alcohol.
El alcohol en la célula sea reemplazado por el xilol.
Impregnación en parafina
Al salir del xilol se coloca en parafina fundida.
El xilol sea reemplazado por la parafina.
Inclusión en bloque de parafina
Conservar la pieza por tiempo prolongado.
Facilitar los cortes con el microtomo.
Cortes
Se obtiene una muestra del tejido en un bloque de parafina, el cual se monta en el micrótomo y se corta en delgadas rebanadas de 4 a 8 micras.
Es un instrumento destinado a realizar cortes histológicos lo suficientemente delgados que permita: la penetración de los reactivos usados para la coloración y el paso de la luz para ser observado al microscopio.
Se coloca la muestra en baño maría para su correcta extensión y luego se coloca en una lámina porta-objetos.
Corte por congelación
Obtener rebanadas de un tejido que no ha pasado por los pasos anteriores de la técnica histológica, mediante la congelación de la muestra.
Permite el estudio del tejido de forma casi inmediata a su obtención.
Se pueden realizar cortes más delgados que por el micrótomo convencional (4 a 2 micras).
Técnica
Obtención del bloque
Se coloca la muestra en una rejilla con un gel especial como medio para el montaje de congelación rápida.
Corte
Se coloca en un micrótomo, el cual se encuentra en el interior una cámara de congelación, llamada criostato a una temperatura de -20°C.
Coloración
Aumentar el contraste de las estructuras biológicas, e identificar componentes mediante su afinidad tintorial.
Eliminar la parafina de la muestra antes de colorear.
Colocando la lámina en la estufa para que la parafina vuelva a su estado líquido, y luego se reemplaza la parafina por xilol.
Se debe rehidratar el tejido, colocando la muestra en una batería de alcoholes de concentraciones decrecientes.
Colorantes
Ácidos
En forma negativa.
Componentes celulares cargados positivamente.
Acidófilos
Grupos aminos de las proteínas.
Básicos
En forma positiva.
Componentes celulares cargados negativamente.
Basófilos
Núcleo de la célula y ciertas regiones en el citoplasma.
Se coloca el tejido ya impregnado de parafina en una caja, ya sea de metal o de papel.
Se coloca parafina líquida.
Se coloca el envase en una plancha fría a fin de que la parafina pase a su estado líquido, obteniéndose así el bloque de parafina.
Técnica
Coloración con Hematoxilina y Eosina
Hematoxilina
Color azul o púrpura
La sustancia observada tiene afinidad por este colorante se denomina BASÓFILA.
Núcleo de la célula
Eosina
Color rosado o rojo
La sustancia observada tiene afinidad por este colorante se denomina ACIDÓFILA.
Citoplasma
Montaje
Ser protegido del ambiente para evitar su hidratación y deterioro.
Cubriendo el preparado con una laminilla cubre-objetos que se mantiene adherida al porta-objetos.
Sustancias o medios conservadores
Bálsamo de Canadá o Mountec.
Técnica