HISTOPROCESAMIENTO

B.Incisional

B. Excisional

B.por punción

Tejidos vegetales y animales marinos

Cultivos celulares

Fluidos corporales

Muestras inorganicas

Seleccionar:

Clasificación

Pueden ser:

Físicos

Calor

Frío

Congelación

Desecación

Químicos

Simples

Mezclas

Según su acción:

F. coagulantes

F. no coagulantes

F. aditivos

F. no aditivos

F. penetrantes

F. poco penetrantes

F. que no alteran
volumen celular

F. que aumentan
volumen celular

F. que disminuyen
volumen celular

F. in situ

F. por perfusión

F. por inmersión

F. por vapores

Considerar:

Grosor y naturaleza
de la muestra

Velocidad de fijación

Velocidad de penetración

Temperatura de fijación

Volumen de fijador

pH de la solución fijadora

Uso de vacío y/o
agitación

Puede ser:

Estudio morfológico a
microscopia de luz

Estudio morfológico a microscopia
electrónica (MET y/o MEB)

Estudio Histoquímico

Estudio Inmunocitoquímico
o Inmunohistoquímico

Según objetivo de estudio

Eleccion del deshidratante

Etanoles

Acetonas

Se realiza por:

Finalidad:

Desplazar el agua de los tejidos

Considerar:

Rápida difusión del agua intra/extracelular
en las muestras deshidratadas.

Por lo tanto:

Se usan alcoholes en graduación ascendente

Ejemplo: uso secuencial de etanol al
70%-80%-96%-100%-100%-100%

Se realiza por:

Finalidad:

Remplazar el alcohol de los tejidos
por estos "líquidos intermediarios"

Ejemplo: Xilol

Considerar:

Tiempo de aclaración

Tiempo prolongado
provoca endurecimiento
de la muestra

Presencia de agua

Formación de precipitado
blanquecino por deshidratación
insuficiente.

Se realiza por:

Se utilizan varios baños de parafina
o paraplast (generalmente 3-4) a 60°

Finalidad:

Eliminar el liquido intemediario

Considerar:

Tamaño de la muestra para
tiempo de impregnación

Uso:

Manualmente en estufa

Automáticamente en
un procesador

Medio Hidrófobo

Pueder ser:

Proceso automatizado

Autotec

Proceso Semimanual

Centro de inclusión

Proceso manual

Uso de:

Contenedores en estufa

Termos histologicos

Cantaros de ceramica

Se usan diferentes moldes, donde:

1. Se agrega parafina liquida

2. Mediante uso de pinzas calientes
se orienta y se pone la muestra a
incluir.

3. Se coloca sobre una platina fría
para la solidificación del bloque

Consideraciones:

Orientación de la muestra
según cara de corte y
dureza de la muestra

Temperatura de la parafina
en la zona caliente

Ejemplo: parafinas duras a 60°

Rotular correctamente
los casetes.

Mantener el orden
de las muestras

Medio Hidrófilo

Se realiza:

Posterior a la fijación y
lavado de la muestra

Mediante la utilización de:

Gelatinas

OCT (soportante)

Agar

Polietilenglicol

Consideraciones:

Según orientación de la muestra

Plano de corte

C. Transversal

C. Sagital

C. Coronal

C. Oblicuo

C. Longitudinal

Según características de la muestra

Rotatorio o tipo Minot

De deslizamiento

De congelación

De deslizamiento

Criostato

Ultramicrotomo

Tipo de navaja

Perfil A: filo bicóncavo

Perfil B: filo plano

Perfil C: filo en forma
de cuña

Perfil D: filo escarpado

Ángulo de inclinación

2°- 4° para cortes de
muestras incluidas
en parafina

5°-7° para cortes de
muestras incluidas
en resinas

1. El bloque de parafina tallado
previamente se fija en la pinza
porta muestra

2. Se orienta la muestra para
enfrentarla a la navaja del cuchillo

Asegurarse de que los tornillos
del carro portamuestra y portacuchillo
esten apretados

3. Usar el avance manual (rapido) para
desgastar el bloque y llegar al tejido

4. Una vez logrado el paso anterior,
determinar grosor de corte con el
cuenta micrones

5. Con la mano derecha accionar la rueda
del microtomo y con la mano izquierda
recojer la cinta

6. Depositar la cinta en el baño histológico

Agua corriente a 40° para estirar los cortes

7. Recuperar el corte con un portaobjeto limpio

8. Secado de los portaobjetos

Para eliminar el exceso de agua

Se realiza en estufa a:

60° por 1 hora

37° por 24 horas

Utilidad:

Puede ser:

Forma aislada
(1 corte)

Forma de cinta
( 2 o + cortes)

Según poder de adherencia
(menor a mayor):

1. Albumina de huevo
de Paul Mayer

2. Cola Fría al
1% acuosa

3. Gelatina
Cromalumbre

4. Silane al 2%
en acetona

Es el más utilizado

"Silanización de portaobjetos"

Favorece la adhesión de los
cortes por acción de cargas

Se debe:

1. Sumergir los portaobjetos en alcohol
acido al 1% durante 1 hora.

2. Secar los portaobjetos en estufa
o con paño batista

3. Sumergir los portaobjetos en acetona P.A
durante 1 minuto y secar.

4. Sumergir los portaobjetos en un contenedor
con silane al 2% en acetona P.A durante
3-5 minutos. Luego secar en papel.

5. Sumergir en una nueva acetona P.A por 5
segundos y secar rápidamente con aire caliente

6. Secar en estufa a 60° por al menos 2 horas

7. Evaluar la calidad de los portaobjetos

Considerar:

Puede ser con:

Lápiz grafito

Lápiz diamante

Uso de colorantes:

Deben presentar:

Clasificación:

Colorantes nitrados

Colorantes azoicos

Colorantes quinoides

Clasificación:

Colorantes ácidos

Colorantes básicos

Colorantes neutros

Se identifican por:

Color Index (C.I)

Mecanismo de coloración:

Enlaces o uniones químicas

Uniones ionicas

Uniones covalentes

Interacciones
hidrofóbicas

Interacciones
Fuerzas de Van
der Waals

Uniones o
puentes de
hidrógeno

Simples

Combinadas

Directas

Indirectas

Progresivas

Regresivas

Panópticas

Pancrómicas

Ortocromáticas

Metacromáticas

Ácidas

Básicas

Vitales

Consideraciones:

Según solución colorante:

Concentración

Solvente a utilizar

Fuerza iónica

pH

Temperatura

Según características
del colorante

Peso molecular

Plasticidad y rigidez
de la molecula

Disposición y carga
de grupos reactivos

Naturaleza según
grumos auxocromos

"Tinción de rutina"

1. Batería de desparafinación
e hidratación

Paso previo a la coloración

Utilidad:

Quitar la parafina de los cortes e hidratarlos

Se debe:

1. Sumergir los cortes en 2-3
baños de xilol

2. Sumergir los cortes en contenedores
de alcohol en graduación descendente

Ejemplo: 100°-100°- 96°-96°-70°

2. Batería de coloración

Es una tinción sucesiva

Por lo tanto:

1. Se sumerge el corte en hematoxilina
oxidada unida a un mordiente

2. En una solución de bórax se sumerge el
corte 3-5 veces para hacer el azulamiento

3. En una solución de etanol ácido se sumerge
el corte para hacer la diferenciación

4. Se lava el corte en agua corriente
(controlando el pH)

5. Sumergir el corte en eosina 1% acuosa

Se puede añadir unas gotas de ácido acético

6. Se lava el corte en agua destilada

3. Batería de deshidratación
y aclaramiento

Paso previo al montaje de la muestra
por medios hidrófobos

Se debe:

1. Sumergir el corte rápidamente 3 veces
en los alcoholes de menor graduación.
Ejemplo: 70°-96°-96°

2. Sumergir por 3 minutos en el
alcohol de 100°

3. Sumergir por 5 minutos en el
ultimo alcohol antes del xilol

4. Sumergir el corte en xilol para
hacer el proceso de aclaramiento

Utilidad:

Entonces:

Se coloca una gota del medio de adhesión
entre la muestra y el cubreobjetos

Por lo tanto:

El preparado queda sellado

Facilitar la manipulación
de los preparados

Considerar:

Medios Hidrófobos

Donde las muestras posterior a la
coloración deben deshidratarse

Ejemplos:

Resina natural

Balsamo de Canada

Resina mixta

Euparal

Resina sintética

Entellan

Medios Hidrófilos

Donde las muestras posterior a la
coloración no deben pasar por
solventes orgánicos

Ejemplos:

Gelatinas

Jarabe de Von Apathy

Gelatina de kaiser

Jarabe de Lillie y Ashburn