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Digestion / Cartographie de l'ADN plasmidique

Cartographie du plasmide

Détermination du sens d'insertion du plasmide

Comparaison avec les résultats attendues

Hind III

Eco RI

BamHI

Clonage

Sélection des bactéries

Culture des colonies en milieu liquide

Repiquage des colonies positives

Culture sur antibiotique de sélection

Ampicilline

Préparation des bactéries

Electroporation des bactéries

Choc thermique

Choc électrique

Ligation de l'ADN d'intérêt

Enzyme de ligation : Ligase

Digestion par enzymes de restriction

Isolation de l'ADN plasmidique

Lavage de l'ADN

Ethanol

Laisser évaporer

Précipitation différentielle de l'ADN plasmidique / Solution S3

Acétate de potassium

Précipite d'ADN plasmidique lié au SDS

pH = 4 (acide)

Stoppe la dénaturation controlée

Dénaturation controlée de l'ADN plasmidique / Solution S2

SDS

Détergent

Déstructuration des membranes

NaOH

pH basique

Dénaturation des protéines

Digestion des bactéries / Solution S1

EDTA

Chélateur d'ions divalents (Ca, Mg)

Permet d'inactiver les DNases qui dépendent de ces ions

RNase I

Clive l'ARN

Centrifugation des bactéries

Culot de bactéries

Mini préparation d'ADN plasmidique