Organigrama

HISTOPROCESAMIENTO

MEDIO DE MONTAJE

Tipos de medios de montaje:

Medios Hidrófilos

Jarabe de Lillie y Ashburn

Gelatina de kaiser

Jarabe de Von Apathy

Donde las muestras posterior a la coloración no deben pasar por solventes orgánicos

Medios Hidrófobos

Ejemplos:

Resina sintética

Entellan

Resina mixta

Euparal

Resina natural

Balsamo de Canada

Donde las muestras posterior a la coloración deben deshidratarse

El indice de refracción del medio de montaje

Facilitar la manipulación de los preparados

Permitir que los preparados histológicos se conserven en el tiempo.

Entonces:

Se coloca una gota del medio de adhesión entre la muestra y el cubreobjetos

El preparado queda sellado

COLORACIÓN

"Tinción de rutina"

Hematoxilina Eosina

3. Batería de deshidratación y aclaramiento

Paso previo al montaje de la muestra por medios hidrófobos

4. Sumergir el corte en xilol para hacer el proceso de aclaramiento

3. Sumergir por 5 minutos en el ultimo alcohol antes del xilol

2. Sumergir por 3 minutos en el alcohol de 100°

1. Sumergir el corte rápidamente 3 veces en los alcoholes de menor graduación. Ejemplo: 70°-96°-96°

2. Batería de coloración

Es una tinción sucesiva

6. Se lava el corte en agua destilada

5. Sumergir el corte en eosina 1% acuosa

Se puede añadir unas gotas de ácido acético

4. Se lava el corte en agua corriente (controlando el pH)

3. En una solución de etanol ácido se sumerge el corte para hacer la diferenciación

2. En una solución de bórax se sumerge el corte 3-5 veces para hacer el azulamiento

1. Se sumerge el corte en hematoxilina oxidada unida a un mordiente

1. Batería de desparafinación e hidratación

Paso previo a la coloración

Quitar la parafina de los cortes e hidratarlos

2. Sumergir los cortes en contenedores de alcohol en graduación descendente

Ejemplo: 100°-100°- 96°-96°-70°

1. Sumergir los cortes en 2-3 baños de xilol

Según características del colorante

Naturaleza según grumos auxocromos

Disposición y carga de grupos reactivos

Plasticidad y rigidez de la molecula

Peso molecular

Según solución colorante:

Temperatura

Fuerza iónica

Solvente a utilizar

Concentración

Clasificaciones de coloraciones:

Vitales

Básicas

Ácidas

Metacromáticas

Ortocromáticas

Pancrómicas

Panópticas

Regresivas

Progresivas

Indirectas

Directas

Combinadas

Uso de colorantes:

Sustancias que se unen a estructuras tisulares y/o celulares cediéndoles color

Mecanismo de coloración:

Enlaces o uniones químicas

Uniones o puentes de hidrógeno

Interacciones Fuerzas de Van der Waals

Interacciones hidrofóbicas

Uniones covalentes

Uniones ionicas

Se identifican por:

Color Index (C.I)

Deben presentar:

Auxocromo

Colorantes neutros

Colorantes básicos

Colorantes ácidos

Cromóforo

Clasificación:

Colorantes quinoides

Colorantes azoicos

Colorantes nitrados

MEDIO DE ADHESIÓN

Identificación de los portaobjetos

Puede ser con:

Lápiz diamante

Lápiz grafito

Tipos de medios adhesivos:

Según poder de adherencia (menor a mayor):

4. Silane al 2% en acetona

Es el más utilizado

"Silanización de portaobjetos"

Favorece la adhesión de los cortes por acción de cargas

Se debe:

7. Evaluar la calidad de los portaobjetos

6. Secar en estufa a 60° por al menos 2 horas

5. Sumergir en una nueva acetona P.A por 5 segundos y secar rápidamente con aire caliente

4. Sumergir los portaobjetos en un contenedor con silane al 2% en acetona P.A durante 3-5 minutos. Luego secar en papel.

3. Sumergir los portaobjetos en acetona P.A durante 1 minuto y secar.

2. Secar los portaobjetos en estufa o con paño batista

1. Sumergir los portaobjetos en alcohol acido al 1% durante 1 hora.

3. Gelatina Cromalumbre

2. Cola Fría al 1% acuosa

1. Albumina de huevo de Paul Mayer

Utilidad:

Adherir el corte al portaobjeto de mejor forma

Forma de cinta ( 2 o + cortes)

Forma aislada (1 corte)

CORTE

Método convencional:

8. Secado de los portaobjetos

Se realiza en estufa a:

37° por 24 horas

60° por 1 hora

Para eliminar el exceso de agua

7. Recuperar el corte con un portaobjeto limpio

6. Depositar la cinta en el baño histológico

Agua corriente a 40° para estirar los cortes

5. Con la mano derecha accionar la rueda del microtomo y con la mano izquierda recojer la cinta

4. Una vez logrado el paso anterior, determinar grosor de corte con el cuenta micrones

3. Usar el avance manual (rapido) para desgastar el bloque y llegar al tejido

2. Se orienta la muestra para enfrentarla a la navaja del cuchillo

Asegurarse de que los tornillos del carro portamuestra y portacuchillo esten apretados

1. El bloque de parafina tallado previamente se fija en la pinza porta muestra

Ángulo de inclinación

5°-7° para cortes de muestras incluidas en resinas

2°- 4° para cortes de muestras incluidas en parafina

Según características de la muestra

Tipo de navaja

Perfil D: filo escarpado

Perfil C: filo en forma de cuña

Perfil B: filo plano

Perfil A: filo bicóncavo

Tipos de micrótomo

Ultramicrotomo

Criostato

De congelación

De deslizamiento

Rotatorio o tipo Minot

Según orientación de la muestra

Plano de corte

Tipos de corte:

C. Longitudinal

C. Oblicuo

C. Coronal

C. Sagital

C. Transversal

INCLUSIÓN

Medio Hidrófilo

Se realiza:

Posterior a la fijación y lavado de la muestra

Impregnación en estufa a 37°-40°.

Mediante la utilización de:

Polietilenglicol

Agar

OCT (soportante)

Gelatinas

Medio Hidrófobo

Formación del bloque de inclusión por solidificación del medio de inclusión a temperatura ambiente

Consideraciones:

Mantener el orden de las muestras

Rotular correctamente los casetes.

Temperatura de la parafina en la zona caliente

Ejemplo: parafinas duras a 60°

Orientación de la muestra según cara de corte y dureza de la muestra

Se usan diferentes moldes, donde:

3. Se coloca sobre una platina fría para la solidificación del bloque

2. Mediante uso de pinzas calientes se orienta y se pone la muestra a incluir.

1. Se agrega parafina liquida

Pueder ser:

Proceso manual

Uso de:

Cantaros de ceramica

Termos histologicos

Contenedores en estufa

Proceso Semimanual

Centro de inclusión

Proceso automatizado

Autotec

IMPREGNACIÓN

Infiltración de los tejidos en el medio de inclusión

Se utilizan varios baños de parafina o paraplast (generalmente 3-4) a 60°

Uso:

Automáticamente en un procesador

Manualmente en estufa

Tamaño de la muestra para tiempo de impregnación

Eliminar el liquido intemediario

ACLARACIÓN

Inmersión de los tejidos en solventes orgánicos

Presencia de agua

Formación de precipitado blanquecino por deshidratación insuficiente.

Tiempo de aclaración

Tiempo prolongado provoca endurecimiento de la muestra

Remplazar el alcohol de los tejidos por estos "líquidos intermediarios"

Ejemplo: Xilol

DESHIDRATACIÓN

Se realiza por:

Inmersión de los tejidos en líquidos deshidratantes

Rápida difusión del agua intra/extracelular en las muestras deshidratadas.

Por lo tanto:

Se usan alcoholes en graduación ascendente

Ejemplo: uso secuencial de etanol al 70%-80%-96%-100%-100%-100%

Finalidad:

Desplazar el agua de los tejidos

Eleccion del deshidratante

Acetonas

Etanoles

FIJACIÓN

Según objetivo de estudio

Puede ser:

Estudio Inmunocitoquímico o Inmunohistoquímico

Estudio Histoquímico

Estudio morfológico a microscopia electrónica (MET y/o MEB)

Estudio morfológico a microscopia de luz

Considerar:

Uso de vacío y/o agitación

pH de la solución fijadora

Volumen de fijador

Temperatura de fijación

Velocidad de penetración

Velocidad de fijación

Grosor y naturaleza de la muestra

Seleccionar:

MÉTODO DE FIJACIÓN

F. por vapores

F. por inmersión

F. por perfusión

F. in situ

FIJADOR

Clasificación

Según su acción:

F. que disminuyen volumen celular

F. que aumentan volumen celular

F. que no alteran volumen celular

F. poco penetrantes

F. penetrantes

F. no aditivos

F. aditivos

F. no coagulantes

F. coagulantes

Pueden ser:

Químicos

Mezclas

Simples

Físicos

Frío

Desecación

Congelación

Calor