CUANTIFICACIÓN DEL ADN

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GENÉTICA La genética es una rama de la biología que estudia cómo se transmiten los caracteres de los padres a sus hijos (caracteres hereditarios se transmiten de generación en generación).

Ved Santiago Naranjo

normas GATISO

Ved angela patricia perez

CLASIFICACIÓN DE TRIAGE

Ved DAVID CASTELLANOS

Génetica es la rama de la biología que estudia el almacenamiento de información en los organismos vivos y como esta información puede transmitirse de los progenitores a sus descendientes

Ved Estefany Delgado

BIBLIOGRAFIA 1. Sambrook J, Russell D. Molecular cloning. 3rd ed. Cold Spring Harbor, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory; 2001. 2. Las bases de la espectrofotometría | HANNA Instruments Colombia [Internet]. Hannacolombia.com. 2021 [cited 19 October 2021]. Available from: https://www.hannacolombia.com/blog/post/206/las-bases-la-espectrofotometria 3. Sanchez Casco M. [Internet]. Repositorio.cinvestav.mx. 2021 [cited 19 October 2021]. Available from: https://repositorio.cinvestav.mx/bitstream/handle/cinvestav/1414/SSIT0012683.pdf?sequence=1 4. Diccionario histórico de la lengua española [Internet]. Real Academia Española. 2021 [cited 19 October 2021]. Available from: https://www.rae.es/dhle/fluorometr%C3%ADa 5. DNA Quantification by Gel Densitometry with Norgen DNA Ladders [Internet]. Biocat.com. 2021 [cited 19 October 2021]. Available from: https://www.biocat.com/bc/pdf/DNA_Quantification_with_Norgen_DNA_Markers.pdf

CUANTIFICACIÓN DEL ADN

- Existen distintos métodos para cuantificar la concentración de ADN. - Su elección varía según el nivel de pureza de la muestra (es decir, sin cantidades significativas de contaminantes como proteínas, fenol, agarosa u otros ácidos nucleicos). - Ningún método es realmente efectivo, todos proporcionan datos estimados. - Es de gran importancia para el análisis de PCR, y la patología tumoral pues contribuyen al diagnóstico y valoración pronóstica de los pacientes.

INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA

Existen otros métodos tales como

FLUOROMETRÍA

- Método de análisis utilizado para medir la intensidad de la radiación que emite un material fluorescente al ser excitado con luz ultravioleta. - Se basa en la medición de señales de luz que son convertidas mediante amplificadores a señales de voltaje. - Se emite luz ultravioleta de aproximadamente 365 nm que incide sobre la muestra y la excita. - La fluorometría es más sensible al medir la concentración de ADN, permitiendo la detección de nanogramos de ADN. - Esta técnica se ha utilizado para estudiar las interacciones entre lípidos y proteínas. - Existen muchos tintes fluorescentes como PicoGreen® y QuantiFluor ™ que se unen específicamente al ADN de doble hebra y permiten medir su concentración.

DENSITOMETRÍA

- Permite la realización de un análisis cualitativo -El gel es digitalizado y la imagen es usada para dicha cuantificación -Se requiere la utilización de un scanner (densitómetro), y la implementación de un software para la obtención de datos mediante la comparación de intensidades y áreas de las bandas de ADN

PROCESO

-Se hace una tinción previa en el gel de agarosa (bromuro de etidio), vertido con el gel del densitómetro, se da el proceso del corrido electroforético, buffer con bromuro de etidio a una concentración de 0,5 µg por ml para un tiempo prescrito de 30 a 60 minutos dependiendo de la espesor del gel. - Cabe resaltar que la concentración y el grosor del gel afectan ya que ambos retrasan la velocidad de difusión, la aplicación de los geles debe ser aplicada de manera adecuada para la correcta visualización de la imagen , ya que puede ser saturada y crear pixeles.

FUNDAMENTO TEORICO

- Esta técnica está basada en el espectro electromagnético. - Se fundamenta en que "cualquier solución que contenga moléculas suspendidas permite el paso de un haz de luz a través de ella en proporción inversa a la cantidad de moléculas que contiene". - El proceso inicia cuando la luz UV, emitida por una lámpara, pasa por un condensador y se dirige hacia la muestra, que se encuentra en una celda de cuarzo. - La luz será absorbida de manera proporcional de acuerdo a la concentración de la muestra. - Un detector mide la luz que no es absorbida por la muestra, esta se resta a la luz inicial emitida y genera así una lectura en unidades de absorbancia entre 0.001 a 1.000. - Mientras más luz absorba la muestra (absorbancia) mayor será la concentración de ácidos nucleicos. - La densidad óptica (OD) es la unidad de absorbancia y tiene valores particulares para cada molécula específica en una determinada longitud de onda por unidad de distancia. En el caso de los ácidos nucleicos, una OD de 1 a 260 nm equivale a 50 μg/ml de ADNds, 37 μg/ml de ADNss

CARACTERISTICAS

- Es un proceso rápido, simple y evita la destrucción de la muestra - Es el método más común a la hora de medir la cantidad de ADN y ARN en soluciones puras concentradas. - Es comparativamente insensible - Requiere de concentraciones de ácidos nucleicos de al menos 1μg/ml para obtener un estimado confiable de A260. - No se puede distinguir fácilmente entre ADN y ARN, y no puede usarse en preparaciones de ácidos nucleicos que no hayan sido purificadas.

ANTECEDENTES

- Los nucleótidos de ADN y ARN presentan la absorción máxima a una longitud de onda de 260 nm (luz ultravioleta, UV). - La estructura química del ADN confiere su capacidad de absorbancia a determinada longitud de onda; p. ej. los anillos heterocíclicos que hacen parte de las bases nitrogenadas. - Se reconoce que los grupos potencialmente reactivos se encuentran dentro de la hélice central, atados por enlaces de hidrógeno; mientras pares de bases están protegidos por una notable envoltura de fosfatos y azúcares y están reforzados internamente por fuertes fuerzas de apilamiento.